簡介

原理

酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測標本。該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號，電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算，最后由顯示器和打印機顯示結(jié)果。微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程。而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測，因此省去了X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單。

微孔板是一種經(jīng)事先包埋專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液。

光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光，但對綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。

隨著檢測方式的發(fā)展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀，可檢測吸光度（Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學(xué)發(fā)光（Lum)。

酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長，而濾光片型酶標儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。

中心定位

儀器會自動對酶標孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行檢測時，儀器其實要進行35個點的測量，選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。

光源的參照通道

參照通道是用來校準由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。

用途和其它提示

用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。

質(zhì)量控制

質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質(zhì)量控制。

空白校正

有一些試劑盒的說明書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的，請按照試劑盒的說明書要求進行。

檢測結(jié)果的解釋

由于有相當多的因素會影響檢測的結(jié)果，如不同的酶標板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行。

結(jié)構(gòu)

規(guī)格有24孔板，48孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對其可進行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測。

酶標儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，聚光鏡，光欄后到達反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管。

酶標儀和普通的光電比色計有以下幾點差異：

（1）盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強的吸附作用，故用它作為固相載體。

（2）由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。

（3）酶標儀通常不僅用A，有時也使用光密度OD來表示吸光度.酶標儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器有X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試，手動型則靠手工移動微孔板來進行測量。

在單通道酶標儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標儀，此類酶標儀一般都是自動化型的。它設(shè)有多個光束和多個光電檢測器，如12個通道的儀器設(shè)有12條光束或12個光源，12個檢測器和12個放大器，在X方向的機械驅(qū)動裝置的作用下，樣品12個為一排被檢測.多通道酶標儀的檢測速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價格也較高。

用途

可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析（A260/A280）和蛋白定量（A280/BCA/Braford/Lowry），酶活、酶動力學(xué)檢測，酶聯(lián)免疫測定（ELISAs），細胞增殖與毒性分析，細胞凋亡檢測（MTT），報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析（GPCR）等。

選購指南

酶標儀（MicroplateReader）是對酶聯(lián)免疫檢測（EIA）實驗結(jié)果進行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。

酶標儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用，使得酶標儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時促進了生殖健康技術(shù)水平提高。

國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目，如：乙肝五項、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法，報出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對照品的OD值×2.5，通過目測無法判斷標本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。

國內(nèi)多家權(quán)威機構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強調(diào)酶標儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標儀，并提供酶標儀測定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變（如：肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴謹，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。

自檢校準

1.外觀

酶標儀上應(yīng)有儀器名稱，型號，編號，生產(chǎn)廠家，出廠日期和電源電壓；各調(diào)節(jié)旋鈕，按鍵和開關(guān)均能正常工作，外表面無明顯機械損傷；顯示文字應(yīng)清楚完整。

2.酶標儀的穩(wěn)定性(漂移)

選用492nm波長，在吸光度0.0A處，測定標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進行)，記錄儀器示值或均值，10min后再次記錄儀器示值或均值，前后兩次測定值之差不應(yīng)超過±0．005A。

3.吸光度測定的準確度

選用405，492和620nm波長，以空氣為參比，分別測定標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片，用專用測試板代替酶標板，按儀器說明連續(xù)測定3次，按下式計算準確度：AA=1/3(A、 A。 A3)—A：(A：為標準值)。

4.吸光度測定的重復(fù)性

波長選擇同(3)，在酶標板第一排加注空白溶液，第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液，重復(fù)測定5次。記錄每次測定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值與各次對應(yīng)孔吸光度值。按下式計算重復(fù)性：

5.酶標儀的線性

選用540nm波長，將標稱值0.5，1.0A中性濾光片分別放入專用測試板樣本位置中，以空氣為參比，各重復(fù)測定3次；然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專用測試板的同一孔位中，重復(fù)測定3次。

6.測定速度的檢定

選用492nm波長，放入96孔酶標板進行測定，用秒表計測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時間。

酶標儀除了在選購時，應(yīng)盡可能自檢外，在使用中也應(yīng)定期檢定，以保證酶標儀測定的有效性。

規(guī)格性能

1.光學(xué)系統(tǒng)

光柵光路系統(tǒng)，包括內(nèi)建的參比檢測通道，確保任何測量情況下獲得一致的結(jié)果。

2.光路

長壽命閃爍氙燈光源，光柵單色光發(fā)生器，200~1000nm波長范圍內(nèi)全波長掃描，1nm步進

3.檢測模式

在微孔板檢測模式和比色杯檢測模式下均可進行全波長范圍光譜掃描，對樣品和空白同時掃描。

4.光譜掃描速度

10s，200~1000nm，1nm步進

5.樣品前處理

無需衍生處理，即可直接測定DNA、RNA和蛋白的吸光值。

6.光程校準

使用微孔板檢測時可直接讀出OD值和濃度，對于水相溶液可使用光程校正

7.樣品容器

可使用96&384孔板，或標準杯/微量杯

8.帶寬

帶寬2.4nm

9.讀數(shù)范圍

0~4OD

10.線性范圍

@450nm：0~2.5Abs，±2%

11.檢測準確度

@450nm：1% 0.003Abs（0~2.0Abs），2%(2.0~2.5Abs）

12.檢測精度

@450nm<1.0%CV

13.檢測速度

8s/96孔；13s/384孔

14.溫控范圍

微孔板和比色杯模式均具溫控功能，溫控范圍（室溫 4)~65℃

15.振蕩模式

軌道，雙軌道和線性三種調(diào)速振蕩模式，動力學(xué)過程中可執(zhí)行背景振蕩模式

16.數(shù)據(jù)處理及分析

通過PC端數(shù)據(jù)分析軟件Gen5進行操作和設(shè)置：曲線擬合、定量分析、定性分析、動力學(xué)計算、自定義方程以、平行線分析（PLA，符合歐盟法規(guī)要求）及效價分析等。數(shù)據(jù)可一鍵導(dǎo)出到Excel，也可生成詳盡的結(jié)果報告。

17.電源

電源輸入100-240V(50/60Hz），最大功率消耗90W

18.體積

外部尺寸（HxWxD)216x216x406mm

19.重量

11kg

20.配置

全波長讀數(shù)儀一套（含比色杯基座）（比色皿必須為立式），標準96孔酶標板一包，電源線壹根，說明書一份，軟件光盤一張。

操作注意事項

酶標儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結(jié)果，操作過程隨意性較大，在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣，會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應(yīng)注意以下事項：

1.使用加液器加液，加液頭不能混用。

2.洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。

3.嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時間準確。

4.在測量過程中，請勿碰酶標板，以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。

5.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請洗手。

6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請嚴格按照試劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。

7.如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請進行清洗和消毒。

8.不要在測量過程中關(guān)閉電源。

9.對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以達到最佳效果。

10.使用后蓋好防塵罩。

11.出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標儀。