一、分光光度計(jì)是測(cè)什么的

分光光度計(jì)，又稱光譜儀（spectrometer），是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器。分光光度法是在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長(zhǎng)范圍為：200～380nm的紫外光區(qū)，380～780nm的可見(jiàn)光區(qū)，2.5～25μm（按波數(shù)計(jì)為4000cm～400cm）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測(cè)量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進(jìn)行校正檢定。

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。

二、光譜儀和分光光度計(jì)區(qū)別

“光譜儀”和“分光光度計(jì)”是同一類儀器，但是“光譜儀”的名稱之前是不需要冠之以“分光”的，因?yàn)橐氲玫焦庾V，就必須分光。光度計(jì)可以是積分光度計(jì)（光強(qiáng)計(jì)），不需要分光；一旦分光，它就是“光譜儀”。另外，“光譜儀”和“分光光度計(jì)”的結(jié)構(gòu)區(qū)別是：“光譜儀”分光不需要掃描（如CCD光譜儀），工作速度快；“分光光度計(jì)”分光需要掃描，工作速度慢。

三、分光光度計(jì)的組成部分

1、光源

在吸光度的測(cè)量中，要求光源發(fā)出的所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜具有足夠的光強(qiáng)度，并能在一定時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。

2、單色器

單色器是能將光源發(fā)射的連續(xù)光源分解為單色光并從中選出任一波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。它由入射狹縫、準(zhǔn)光器、色散原件、聚焦元件和出射狹縫等幾個(gè)部分組成。

3、吸收池

吸收池又稱比色皿，用于盛裝參比溶液和待測(cè)試液。儀器一般配有液層厚度為0.5cm、1cm、2cm、3cm等的長(zhǎng)方形比色皿。

4、檢測(cè)系統(tǒng)

檢測(cè)系統(tǒng)通常通過(guò)利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)的電信號(hào)，而且所產(chǎn)生的電信號(hào)應(yīng)與照射于檢測(cè)器上的光信號(hào)成正比?？梢?jiàn)分光光度計(jì)常常使用光電管或光電倍增管做檢測(cè)器。

5、信號(hào)顯示系統(tǒng)

光電轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生的各種電信號(hào)，經(jīng)放大等處理后，用一定方式顯示出來(lái)，以便于計(jì)算和記錄。

四、分光光度計(jì)原理

分光光度計(jì)的原理是采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度，樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

五、分光光度計(jì)的種類

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)

用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，稱為可見(jiàn)分光光度計(jì)。

2、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

紫外可見(jiàn)光譜儀用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光或紫外光（200-760nm）的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，可以測(cè)定核酸和蛋白的濃度，也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。

3、紅外分光光度計(jì)

一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜，這是研究有機(jī)化合物最常用的光譜區(qū)域，能分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的試樣。

4、熒光分光光度計(jì)

熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器，應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域，通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定，不但可以做一般的定量分析，而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。

六、分光光度計(jì)使用步驟方法

1、接通電源，打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，掀開(kāi)樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。

2、將靈敏度開(kāi)關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí)，需選用較高檔。）

3、根據(jù)所需波長(zhǎng)轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)選擇鈕。

4、將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對(duì)準(zhǔn)光路。

5、在暗箱蓋開(kāi)啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6、蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針?lè)€(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測(cè)定管的光密度值，并記錄。

7、比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

七、分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)

1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

2、使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開(kāi)關(guān)。

3、在儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。