一、培養(yǎng)基配好后為什么必須立即滅菌

培養(yǎng)基配好后，必須要馬上進行滅菌處理，這是為什么呢？

之所以培養(yǎng)基配好就要滅菌，是因為未滅菌的剛剛配置好的培養(yǎng)基是暴露在環(huán)境中的，可能染上環(huán)境中的大量細菌，而培養(yǎng)基也是這些細菌生長所需要的良好條件；如果不及時滅菌，會導(dǎo)致在環(huán)境中染上的細菌大量繁殖，消耗培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，甚至產(chǎn)生有害物質(zhì)，造成培養(yǎng)基滅菌后也不能使用。

二、如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否為無菌

滅菌后，如果要求比較嚴格，必須是無菌培養(yǎng)基的話，可以進行無菌試驗，具體的方法是：

將已經(jīng)滅完菌的菌棒放到25－28℃的恒溫環(huán)境中避光培養(yǎng)3天后，拿出來檢查看袋內(nèi)有沒有雜菌滋生的痕跡，看菌袋內(nèi)有沒沒有導(dǎo)演變色、出現(xiàn)斑點等情況的發(fā)生，如果有就證明滅菌不徹底。

三、影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素有哪些

培養(yǎng)基滅菌要求要徹底，不徹底的話可能影響微生物的培養(yǎng)，一般影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素主要有：

1、營養(yǎng)成分的保持

濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng)，造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化，因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。

2、微生物的耐熱性

細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少到所規(guī)定數(shù)目的時間。

3、pH值

pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時，微生物最不易死亡。pH<6.0時，微生物比較容易死亡，此時H 很容易滲入微生物的細胞，從而改變細胞的生理反應(yīng)，促使其死亡。所以培養(yǎng)基的pH越低，所需的時間也越短。

4、培養(yǎng)基成分

油脂、糖類及蛋白質(zhì)等組成的高濃度有機物會包于細胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導(dǎo)。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性，滅菌較易。例如：大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡，在30%糖液中需30分鐘才死亡。一般糖類含量較多的時候最好選用115℃，30分鐘；一般的培養(yǎng)基可選擇121℃20分鐘。

5、泡沫

泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進去，殺死其中的雜菌。

6、顆粒

顆粒小，容易滅菌，顆粒大，則難滅菌。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養(yǎng)基，可用粗濾的方法（不應(yīng)影響培養(yǎng)基質(zhì)量）予以除去，培養(yǎng)基結(jié)塊會造成培養(yǎng)基滅菌的不徹底。

8、滅菌鍋內(nèi)空氣是否排凈

這個是影響滅菌是溫度和壓力比例關(guān)系的要點，同樣達到了相同的壓力的情況下，如果空氣未能排凈，也就是說不是純蒸汽滅菌，此時的溫度不一定能達到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。