一、色譜柱的日常維護(hù)方法
流動(dòng)相處理:流動(dòng)相需使用高純度的試劑和超純水配制,使用前要經(jīng)過 0.45μm 或更小孔徑的濾膜過濾,去除顆粒雜質(zhì),同時(shí)進(jìn)行脫氣處理,防止氣泡進(jìn)入色譜柱影響分離效果和損壞色譜柱。
樣品處理:樣品應(yīng)盡可能溶解在與流動(dòng)相組成相近的溶劑中,進(jìn)樣前需經(jīng)過過濾或離心處理,去除不溶性雜質(zhì),避免堵塞色譜柱。對(duì)于復(fù)雜樣品,可進(jìn)行預(yù)處理,如萃取、凈化等,以減少雜質(zhì)對(duì)色譜柱的污染。
流速控制:在使用新色譜柱時(shí),應(yīng)從較低的流速開始逐漸增加,直至達(dá)到最佳分離效果的流速,避免初始流速過高對(duì)色譜柱造成沖擊。同時(shí),要確保流速穩(wěn)定,避免流速的突然變化對(duì)色譜柱填料產(chǎn)生破壞。
柱溫控制:根據(jù)色譜柱的使用要求和樣品的性質(zhì),選擇合適的柱溫。一般來說,柱溫應(yīng)保持在色譜柱的耐受溫度范圍內(nèi),避免過高或過低的溫度對(duì)色譜柱造成損傷。同時(shí),要避免柱溫的急劇變化,防止色譜柱填料因熱脹冷縮而損壞。
二、色譜柱的定期維護(hù)方法
沖洗色譜柱:在分析結(jié)束后,應(yīng)及時(shí)用適當(dāng)?shù)娜軇_洗色譜柱,以去除殘留的樣品、流動(dòng)相和雜質(zhì)。對(duì)于反相色譜柱,通常先用高比例的水相沖洗,再用有機(jī)溶劑沖洗;對(duì)于正相色譜柱,則先用有機(jī)溶劑沖洗,再用低極性溶劑沖洗。沖洗時(shí)間一般為 30-60 分鐘,具體時(shí)間可根據(jù)色譜柱的污染程度和使用情況進(jìn)行調(diào)整。
檢查柱效:定期通過分析標(biāo)準(zhǔn)樣品或已知混合物來檢查色譜柱的柱效。如果發(fā)現(xiàn)柱效下降,可能是由于色譜柱污染、填料流失或其他原因引起的,需要及時(shí)采取相應(yīng)的措施進(jìn)行處理,如重新平衡色譜柱、進(jìn)行柱再生或更換色譜柱。
三、色譜柱的保存方法
干燥保存:如果色譜柱需要長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)將其沖洗干凈后,用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑(如甲醇、乙腈等)充滿色譜柱,然后密封兩端,放置在干燥、陰涼、避光的地方保存。避免將色譜柱暴露在空氣中,防止填料干燥收縮或吸收空氣中的水分和雜質(zhì)。
定期活化:對(duì)于長(zhǎng)期未使用的色譜柱,在重新使用前,應(yīng)進(jìn)行活化處理。一般是用流動(dòng)相以較低的流速?zèng)_洗色譜柱,使其達(dá)到平衡狀態(tài)?;罨瘯r(shí)間可能需要數(shù)小時(shí)甚至更長(zhǎng),具體時(shí)間取決于色譜柱的類型和保存時(shí)間。